New insights on tuberculosis transmission dynamics and drug susceptibility profiles among the prison population in Southern Brazil based on whole-genome sequencing

ABSTRACT Background: The rate of tuberculosis (TB) infection among the prison population (PP) in Brazil is 28 times higher than that in the general population, and prison environment favors the spread of TB. Objective: To describe TB transmission dynamics and drug resistance profiles in PP using whole-genome sequencing (WGS). Methods: This was a retrospective study of Mycobacterium tuberculosis cultivated from people incarcerated in 55 prisons between 2016 and 2019; only one isolate per prisoner was included. Information about movement from one prison to another was tracked. Clinical information was collected, and WGS was performed on isolates obtained at the time of TB diagnosis. Results: Among 134 prisoners included in the study, we detected 16 clusters with a total of 58 (43%) cases of M. tuberculosis. Clusters ranged from two to seven isolates with five or fewer single nucleotide polymorphism (SNP) differences, suggesting a recent transmission. Six (4.4%) isolates were resistant to at least one anti-TB drug. Two of these clustered together and showed resistance to rifampicin, isoniazid, and fluoroquinolones, with 100% concordance between WGS and phenotypic drug-susceptibility testing. Prisoners with clustered isolates had a high amount of movement between prisons (two to eight moves) during the study period. Conclusions: WGS demonstrated the recent transmission of TB within prisons in Brazil. The high movement among prisoners seems to be related to the transmission of the same M. tuberculosis strain within the prison system. Screening for TB before and after the movement of prisoners using rapid molecular tests could play a role in reducing transmission.

GenoType MTBDRsl for detection of second-line drugs and ethambutol resistance in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates at a high-throughput laboratory

We assessed the performance of MTBDRsl for detection of resistance to fluoroquinolones, aminoglycosides/cyclic peptides, and ethambutol compared to BACTEC MGIT 960 by subjecting simultaneously to both tests 385 phenotypically multidrug-resistant-Mycobacterium tuberculosis isolates from Sao Paulo, Brazil. Discordances were resolved by Sanger sequencing. MTBDRsl correctly detected 99.7% of the multidrug-resistant isolates, 87.8% of the pre-XDR, and 73.9% of the XDR. The assay showed sensitivity of 86.4%, 100%, 85.2% and 76.4% for fluoroquinolones, amikacin/kanamycin, capreomycin and ethambutol, respectively. Specificity was 100% for fluoroquinolones and aminoglycosides/cyclic peptides, and 93.6% for ethambutol. Most fluoroquinolone-discordances were due to mutations in genome regions not targeted by the MTBDRsl v. 1.0: gyrA_H70R and gyrB_R446C, D461N, D449V, and N488D. Capreomycin-resistant isolates with wild-type rrs results on MTBDRsl presented tlyA mutations. MTBDRsl presented good performance for detecting resistance to second-line drugs and ethambutol in clinical isolates. In our setting, multidrug-resistant. isolates presented mutations not targeted by the molecular assay.

Detection of Drug Resistant Mycobacterium Tuberculosis Strains Using Kit SIRE Nitratase®: a Multicenter Study

Abstract (1) Background: The Commercial Kit SIRE Nitratase® PlastLabor, is a drug susceptibility test kit used to detect Mycobacterium tuberculosis resistance to first-line TB treatment drugs. The present study aimed at evaluating its performance in a multicenter study. (2) Methods: To determine its accuracy, the proportion methods in Lowenstein Jensen medium or the BACTECTMMGITTM960 system was used as a gold standard. (3) Results: The study revealed that the respective accuracies of the kit with 190 M. tuberculosis clinical isolates, using the proportion methods in Lowenstein Jensen medium or BACTECTMMGITTM960 system as a gold standard, were 93.9% and 94.6%, 96.9% and 94.6%, 98.0% and 97.8%, and 98.0% and 98.9%, for streptomycin, isoniazid, rifampicin, and ethambutol, respectively. (4) Conclusion: Thus, the kit can rapidly screen resistance to streptomycin, isoniazid, rifampicin, and ethambutol. Additionally, it does not require sophisticated equipment; hence, it can be easily used in the laboratories of low and middle income countries.

Speeding up the diagnosis of multidrug-resistant tuberculosis in a high-burden region with the use of a commercial line probe assay / Agilizando o diagnóstico da tuberculose multirresistente em uma região endêmica com o uso de um teste comercial de sondas em linha

ABSTRACT Objective: To evaluate the rapid diagnosis of multidrug-resistant tuberculosis, by using a commercial line probe assay for rifampicin and isoniazid detection (LPA-plus), in the routine workflow of a tuberculosis reference laboratory. Methods: The LPA-plus was prospectively evaluated on 341 isolates concurrently submitted to the automated liquid drug susceptibility testing system. Results: Among 303 phenotypically valid results, none was genotypically rifampicin false-susceptible (13/13; 100% sensitivity). Two rifampicin-susceptible isolates harboured rpoB mutations (288/290; 99.3% specificity) which, however, were non-resistance-conferring mutations. LPA-plus missed three isoniazid-resistant isolates (23/26; 88.5% sensitivity) and detected all isoniazid-susceptible isolates (277/277; 100% specificity). Among the 38 (11%) invalid phenotypic results, LPA-plus identified 31 rifampicin- and isoniazid-susceptible isolates, one isoniazid-resistant and six as non-Mycobacterium tuberculosis complex. Conclusions: LPA-plus showed excellent agreement (≥91%) and accuracy (≥99%). Implementing LPA-plus in our setting can speed up the diagnosis of multidrug-resistant tuberculosis, yield a significantly higher number of valid results than phenotypic drug susceptibility testing and provide further information on the drug-resistance level.

RESUMO Objetivo: Avaliar o diagnóstico rápido de tuberculose multirresistente, utilizando um teste comercial de sondas em linha (LPA-plus), na rotina de um laboratório de referência de tuberculose. Métodos: O teste LPA-plus foi avaliado prospectivamente em 341 isolados simultaneamente submetidos ao teste de suscetibilidade aos antimicrobianos em meio líquido, pelo sistema automatizado. Resultados: Entre os 303 resultados fenotipicamente válidos, nenhum foi genotipicamente falso suscetível à rifampicina (13/13; 100% de sensibilidade). Dois isolados sensíveis à rifampicina apresentavam mutações no gene rpoB (288/290; especificidade de 99,3%), as quais, no entanto, não são associadas à resistência a rifampicina. O LPA-plus não identificou resistência à isoniazida em três isolados fenotipicamente resistentes (23/26; 88,5% de sensibilidade) e detectou todos os isolados sensíveis à isoniazida (277/277; especificidade de 100%). Entre os 38 (11%) resultados fenotípicos inválidos, o LPA-plus identificou 31 isolados sensíveis à rifampicina e à isoniazida, um resistente à isoniazida e seis como micobactérias não tuberculosas. Conclusões: O LPA-plus mostrou excelente concordância (≥91%) e acurácia (≥99%). Sua implementação pode acelerar o diagnóstico da tuberculose multirresistente, produzir número significativamente maior de resultados válidos do que o teste fenotípico de suscetibilidade aos antimicrobianos e fornecer informações adicionais sobre o nível de resistência aos fármacos.

Epidemiologia global de pacientes com tuberculose multidrogarresistente (MDR-TB) e extensivamente resistente (XDR-TB) / Global epidemiology of patients with multidrugresistant tuberculosis (MDR-TB) and extensively drug-resistant tuberculosis (XDR-TB)

A tuberculose multidrogarresistente (MDR-TB) e a tuberculose extensivamente resistente (XDR-TB), levantam preocupações pelo grande número de casos, especialmente na África, Ásia e Europa, e pela taxa de sucesso ainda baixa no tratamento, atingindo 54% para MDR-TB e 30% para XDR-TB. O objetivo do presente estudo é relatar as diferentes realidades epidemiológicas dos doentes com MDR-TB e XDR-TB em diferentes partes do mundo. Foram revisados artigos da última década nas bases científicas disponíveis. Os estudos mostraram que a maioria das pessoas afetadas pela MDR-TB são do sexo masculino, migrantes ou imigrantes, que já haviam sido tratados anteriormente. Descrevemos que o tratamento da tuberculose (TB) usualmente resulta em cura, mas também pode levar à seleção dos bacilos mais resistentes. Mostramos que o surgimento de cepas resistentes na TB se deve ao tratamento inadequado de formas mais simples de TB, com cepas resultantes de manejo difícil e que as populações vulneráveis são as mais afetadas. Salientamos que o abandono do tratamento é fator que comumente origina esse problema complexo da doença e elencamos os genes de resistência mais estudados. (AU)

Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) and extensively drug-resistant tuberculosis (XDR-TB) raise concerns for their great number of cases, especially in Africa, Asia and Europe, and for their still low treatment success rate, reaching 54% for MDR-TB and 30% for XDR-TB. The objective of this study is to report the epidemiological situation of patients with MDR-TB and XDR-TB in different parts of the world. Articles published in the last decade were collected from available scientific databases and reviewed. The studies showed that most of those affected by MDR-TB are male, migrants or immigrants, and had been previously treated for tuberculosis (TB). We report that TB treatment usually ends in cure, but may also lead to selection of the most resistant bacilli. We show that the emergence of resistant strains in TB is due to inappropriate treatment of simpler forms of TB, resulting in strains of difficult management, and that the most vulnerable populations are the most affected. We emphasize that treatment dropout is the factor most commonly associated with this complicated issue, and also list the most studied multidrug resistance genes. (AU)

Performance of an in-house real-time polymerase chain reaction for identification of Mycobacterium tuberculosis isolates in laboratory routine diagnosis from a high burden setting

Abstract Brazil is one of the high burden countries for tuberculosis, and a rapid diagnosis is essential for effective control of the disease. In the present study, an in-house real-time polymerase chain reaction (PCR) assay targeting the mpt64 gene for identification of Mycobacterium tuberculosis complex isolates was evaluated under routine diagnosis conditions in a reference laboratory. From May 2011 to July 2012, 1,520 isolates of mycobacteria were prospectively submitted for phenotypic and/or PRA-hsp65 identification and to real-time PCR. The mpt64 real-time PCR showed 99.7% sensitivity and 96% specificity and detected 79.4% of the cases missed by phenotypic and PRA-hsp65 identification. The in-house real-time PCR assay showed high sensitivity and specificity and was successfully implemented in the routine diagnosis of tuberculosis in a reference laboratory from a high burden setting.

Clinical and epidemiological profiles of individuals with drug-resistant tuberculosis

Drug-resistant tuberculosis (TB) is a growing global threat. Approximately 450,000 people developed multidrug-resistant TB worldwide in 2012 and an estimated 170,000 people died from the disease. This paper describes the sociodemographic, clinical-epidemiological and bacteriological aspects of TB and correlates these features with the distribution of anti-TB drug resistance. Mycobacterium tuberculosis (MT) cultures and drug susceptibility testing were performed according to the BACTEC MGIT 960 method. The results demonstrated that MT strains from individuals who received treatment for TB and people who were infected with human immunodeficiency virus were more resistant to TB drugs compared to other individuals (p < 0.05). Approximately half of the individuals received supervised treatment, but most drug-resistant cases were positive for pulmonary TB and exhibited positive acid-fast bacilli smears, which are complicating factors for TB control programs. Primary healthcare is the ideal level for early disease detection, but tertiary healthcare is the most common entry point for patients into the system. These factors require special attention from healthcare managers and professionals to effectively control and monitor the spread of TB drug-resistant cases.

Cenário atual da tuberculose / Current scenario of tuberculosis

Mesmo após 133 anos desde a descoberta do Mycobacterium tuberculosis, a tuberculose continua ser uma das principais causas de morte por doenças infecciosas no mundo, principalmente em países em desenvolvimento.O objetivo deste estudo foi mostrar aspectos relevantes da doença visando uma atualização literária e a busca de um olhar mais atento à problemática da tuberculose no contexto atual. Foram utilizados 130 artigos advindos das bases LILACS, MEDLINE/PUBMED, SCielo, Paho, Biblioteca Cochrane, WHOLIS, IBECS e Scopus, com as principais palavras-chaves selecionadas em terminologia em saúde encontradas no DECS. As espécies pertencentes ao Complexo M. tuberculosis compartilham cerca de 99% de identidade do DNA,com sequências altamente conservadas, mas diferem na distribuição geográfica, patogenicidade e hospedeiros. O mecanismo de resistência clinicamente significativo para rifampicina é uma mutação do gene rpoB, que codifica o alvo desse antibiótico. Há grandes avanços no diagnóstico da TB, com novos instrumentos de biologia molecular e testes rápidos, mas ainda não substituem os métodos clássicos bacteriológicos, apesar de suas conhecidas limitações. Atualmente, a associação de métodos moleculares, principalmente aqueles baseados em reações da PCR tem proporcionado grande impulso nos estudos da epidemiologia molecular do MT. Embora haja uma diminuição do número de casos no mundo, dentre os desafios da doença estão a necessidade de pesquisas na área, envolvimento político para solucionar as questões sociais atribuídas à TB, treinamento permanente dos profissionais e monitoramento de vigilância dos casos para eliminar a doença no cenário mundial.

Even 133 years after the discovery of Mycobacterium tuberculosis, tuberculosis continues to be one of the main causes of death due to infectious diseases worldwide, especially in developing countries. The objective of this study was, after a survey of recent publications, to show issues relevant to the disease and to takea closer look at the tuberculosis problem in the current context. A total of 130 articles were found in the LILACS, MEDLINE/PubMed, SciELO, Paho, Cochrane Library, WHOLIS, IBECS and Scopus databases using the main keywords selected from health terminology of MeSH. Species belonging to the M. tuberculosis complex have highly conserved sequences and share about 99% DNA identity, but differ in their geographic distribution, pathogenicityand host. The clinically significant mechanismof rifampicin resistance is due to a mutation of the rpoB gene which encodes the target of the antibiotic. Great advances in the diagnosis of tuberculosis have occurred, with new molecular biology tools and rapid tests, but without replacing classical bacteriological methods, despite their known limitations. Recently, the association of molecular methods, especially based on PCR, has provided great impetus in molecular epidemiology studies of M. tuberculosis. Although the number of cases in the world has decreased, among the challenges are the need for further research, political involvement to solve social issues linked to tuberculosis, permanent training and the surveillance of cases in order to eliminate the disease on the world stage.

Fast test for assessing the susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid and rifampin by real-time PCR

Mycobacterium tuberculosis is the bacterium that causes tuberculosis (TB), a leading cause of death from infectious disease worldwide. Rapid diagnosis of resistant strains is important for the control of TB. Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assays may detect all of the mutations that occur in the M. tuberculosis 81-bp core region of the rpoB gene, which is responsible for resistance to rifampin (RIF) and codon 315 of the katG gene and the inhA ribosomal binding site, which are responsible for isoniazid (INH). The goal of this study was to assess the performance of RT-PCR compared to traditional culture-based methods for determining the drug susceptibility of M. tuberculosis. BACTEC TM MGIT TM 960 was used as the gold standard method for phenotypic drug susceptibility testing. Susceptibilities to INH and RIF were also determined by genotyping of katG, inhA and rpoB genes. RT-PCR based on molecular beacons probes was used to detect specific point mutations associated with resistance. The sensitivities of RT-PCR in detecting INH resistance using katG and inhA targets individually were 55% and 25%, respectively and 73% when combined. The sensitivity of the RT-PCR assay in detecting RIF resistance was 99%. The median time to complete the RT-PCR assay was three-four hours. The specificities for tests were both 100%. Our results confirm that RT-PCR can detect INH and RIF resistance in less than four hours with high sensitivity.

Mycobacterium tuberculosis detection in the penitentiary system

Descrevemos retrospectivamente a detecção de Mycobacterium tuberculosis (MT) e o seu perfil de suscetibilidade entre detentos de três presídios da região de São José do Rio Preto, São Paulo, Brazil. Entre 2003 e 2006 foram avaliados 1.070 detentos com suspeita de tuberculose (TB). A positividadedo Mycobacterium sp. foi avaliada pela baciloscopia e cultura. A análise estatística foi realizada utilizando o Epi Info e BioEstat. Não houve diferença significante nos resultados positivos entre as três unidades penitenciárias. Foi encontrado um percentual de 6,9por cento de positividade para MT e operfil de sensibilidade mostrou que 4,2por cento dos detentos apresentaram isolados resistentes a isoniazida,enquanto 6,2por cento foram resistentes à rifampicina. Todos os isolados resistentes foram obtidos de presos bacilíferos, apontando para a possibilidade de transmissão intra-institucional. Nossos dados abrem portas para o entendimento da magnitude da tuberculose e o perfil de resistência às drogas do MT no sistema penitenciário do Estado de São Paulo.

Cord factor detection and macroscopic evaluation of mycobacterial colonies: an efficient combined screening test for the presumptive identification of Mycobacterium tuberculosis complex on solid media / Detecção do fator corda e avaliação do aspecto macroscópico das colônias de micobactérias: um eficiente teste de triagem combinado para a identificação presuntiva do complexo Mycobacterium tuberculosis em meios só

OBJECTIVE: The rapid differentiation between Mycobacterium tuberculosis and nontuberculous mycobacteria is fundamental for patients co-infected with tuberculosis and HIV. To that end, we use two methods in our laboratory: detection of cord factor and PCR-restriction enzyme analysis (PRA). The objective of this study was to evaluate the accuracy of a screening test on solid medium as a rapid method for the presumptive identification of M. tuberculosis complex, considering costs and turnover time. METHODS: A total of 152 strains were submitted to a combined screening test, consisting of the detection of cord factor under microscopy (Ziehl-Neelsen staining) and evaluation of the macroscopic aspect of colonies, as well as to PRA, which was used as the gold standard. Costs were estimated by calculating the price of all of the materials needed for each test. RESULTS: The overall accuracy of cord factor detection alone was 95.4 percent (95 percent CI: 90.7-98.1 percent), and that of the combined screening test was 99.3 percent (95 percent CI: 96.4-100 percent). Cord factor detection costs US$ 0.25, whereas the PRA costs US$ 7.00. Results from cord factor detection are ready in 2 days, whereas PRA requires 4 days to yield results. CONCLUSIONS: The presumptive identification of M. tuberculosis using the macroscopic evaluation of colonies combined with cord factor detection under microscopy is a simple, rapid and inexpensive test. We recommend the combined screening test to rapidly identify M. tuberculosis in resource-poor settings and in less well-equipped laboratories while awaiting a definite identification by molecular or biochemical methods.

OBJETIVO: A diferenciação rápida entre Mycobacterium tuberculosis e micobactérias não-tuberculosas é fundamental para os pacientes coinfectados com tuberculose e HIV. Para tanto, utilizamos duas metodologias em nosso laboratório: detecção do fator corda e PCR-restriction enzyme analysis (PRA). O objetivo do estudo foi avaliar a acurácia desse teste de triagem em meio sólido como um método rápido para a identificação presuntiva do complexo M. tuberculosis, considerando custos e tempo de resultado. MÉTODOS: Foram processadas 152 cepas pelo teste de triagem combinado, que consistiu da detecção do fator corda por microscopia (esfregaço corado por Ziehl-Neelsen) e avaliação do aspecto macroscópico das colônias, e PRA (padrão ouro). Os custos foram estimados através da obtenção dos preços dos insumos necessários para a realização de cada teste. RESULTADOS: A acurácia da detecção do fator corda foi de 95,4 por cento (IC95 por cento: 90,7-98,1 por cento) e a do teste de triagem combinado foi de 99,3 por cento (IC95 por cento: 96,4-100 por cento). O custo da detecção do fator corda foi de R$ 0,60 e do PRA de R$ 16,00. Os resultados da detecção do fator corda estão prontos em 2 dias, ao passo que os de PRA necessitam de 4 dias. CONCLUSÕES: A identificação presuntiva de M. tuberculosis usando o aspecto macroscópico das colônias em conjunto com a detecção de fator corda por microscopia é um teste simples, rápido e de baixo custo. Recomendamos o teste de triagem combinado para rapidamente identificar M. tuberculosis em sítios com poucos recursos financeiros e em laboratórios menos equipados, enquanto se aguarda a identificação definitiva por métodos moleculares ou bioquímicos.

Influência da qualidade das culturas de Mycobacterium tuberculosis nos resultados negativos dos testes da pirazinamidase / Influence of Mycobacterium tuberculosis cultures quality conditions on negative results on pyrazinamidase testing

A Organização Mundial da Saúde recomenda o uso do teste da pirazinamidase (PZAse) como método alternativo para determinação da resistência do Mycobacterium tuberculosis à pirazinamida, por ser um teste rápido e de fácil execução. Foram objetivos deste estudo: verificar a reprodutibilidade dos resultados negativos do teste da pirazinamidase quando realizado a partir das culturas originais e de seus subcultivos e relacioná-los com a qualidade das culturas originais e com os perfis de suscetibilidade à estreptomicina (S), isoniazida (I), rifampicina (R) e etambutol (E). Foram analisadas 115 culturas de Mycobacterium tuberculosis cujos cultivos originais apresentaram resultados negativos no teste da PZAse, o que representa resistência à pirazinamida. A qualidade das culturas foi avaliada, anotada e um segundo teste foi realizado a partir de subcultivos jovens e abundantes. A concordância entre os resultados do primeiro e do segundo teste foi de 72,2% e a qualidade das culturas mostrou correlação com os resultados (p< 0,001). O teste da pirazinamidase é útil quando utilizado juntamente com técnicas de detecção de suscetibilidade às drogas S,I,R,E, desde que seja realizado a partir de cultivos com boa qualidade, que permitam a utilização de inóculo abundante.

The pyrazinamidase is a fast and easy to perform assay, recommended by the World Health Organization as an alternative technique to determine pyrazinamide resistant Mycobacterium tuberculosis strains. This study aimed to assess the reproducibility of negative results on pyrazinamidase assay using both primary cultures and respective subcultures, and to correlate them with original cultures quality, as well as their susceptibility profile to streptomycin (S), isoniazid (I), rifampin (R) and ethambutol (E). A total of 115 Mycobacterium tuberculosis cultures were analyzed, which the original growth produced negative results on pyrazinamidase assay, implying a resistance to pyrazinamide. The cultures quality was assessed and recorded; a second testing was performed using recent and abundant subcultures. Results from the first and the second tests demonstrated an agreement rate of 72.2%, and the cultures quality showed correlation with the results (p<0.001). Pyrazinamidase testing is useful when it is combined with other techniques for analyzing mycobacteria susceptibility to S, I, R, E since it is performed with high quality cultures which allow the use of abundant inocula.

Análise do comportamento de variantes fenotípicas de cepas de Mycobacterium avium em animais e macrófagos / Analysis of the behavior of phenotypic variants of Mycobacterium avium strains in animals and cells

Mycobacterium avium é uma bactéria ambiental e na classificação de patogenicidade está incluída entre as micobactérias potencialmente patogênicas, pois se trata de um patógeno oportunista em animais e humanos. O interesse em estudar fatores de virulência e patogenicidade destas bactérias aumentou após o isolamento de M. avium em amostras de pacientes portadores do vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). O objetivo deste estudo foi isolar variantes de colônias de sete cepas de M. avium isoladas de fontes humanas e animais, caracterizadas molecularmente em nosso laboratório e avaliar o comportamento e a capacidade de multiplicação das variantes fenotípicas em experimentos com animais (hamster) e cultura de células (macrófagos). Nos cultivos iniciais, cinco das sete cepas (71,4 por cento) apresentaram variantes de colônias OP e TL e duas cepas (28,6 por cento) não apresentaram variações no fenótipo das colônias. As colônias OP recuperadas dos baços dos animais inoculados mantiveram a mesma morfologia, branca opaca e lisa, enquanto que houve alteração na mortologia nas variantes TL, de lisa transparente para rugosa transparente (TL-Rg). As variantes mantiveram a mesma identificação original por PRA-hsp65 e a mesma tipificação por RFLP-IS1245 após a passagem por animais. Com todas as cepas houve maior recuperação de UFC por grama de baço e maior índice de multiplicação intracelular com a variante TL quando comparada à variante OP. Foi avaliado o percentual de células infectadas nos dias O e 7. Houve aumento no percentual de macrófagos infectados no dia 7 com todas as cepas, com diferença estatisticamente significante em 5 das 12 variantes das cepas estudadas. Quanto ao número de bacilos por macrófago infectado, foi observado que no dia O a maioria dos macrófagos infectados com as variantes OP e TL albergaram de 1 a 15 bacilos enquanto que no dia 7 a quantidade de bacilos que os macrófagos albergaram foi distribuída em freqüências de 1 a mais que 50. Com todas as cepas, a variante TL apresentou uma tendência de distribuição nas freqüências mais elevadas quando comparada à distribuição da variante OP no dia 7. A variante TL das cepas do estudo apresentou maior capacidade de sobrevivência e multiplicação em experimentos in vivo e in vitro.

Avaliaçäo da virulência em hamsters (Mesocricetus auratus) de estirpes de Mycobacterium avium presentes na populaçäo de suínos do sul do Brasil / Evaluation of the virulence in hamsters (Mesocricetus auratus) of Mycobacterium avium strains from the swine population of the south of Brazil

Tendo sido comprovada a existência de quatro famílias molecularmente distintas de M. avium (PIG-A, B, C e D) circulando em suínos da regiäo sul do Brasil, e havendo dúvidas a respeito da importância da transmissäo horizontal como mecanismo de manutençäo da doença, o presente teve por objetivo estudar a virulência dessas estirpes, informaçäo importante para o aperfeiçoamento dos métodos de controle. Uma estirpe representante de cada família foi inoculada pela via intra-peritoneal em 48 hamsters com uma dose de 30.000 U.F.C. por animal. Após 2, 13, 26 e 40 dias da inoculaçäo (T1 a T4), 12 hamsters inoculados de cada família foram anestesiados, sacrificados e os agentes foram quantificados no fígado, baço e pulmäo. Os resultados foram expressos em número de U.F.C./g de órgäo. A presença das estirpes foi pesquisada no sangue e também foram realizados exames histológicos. As estirpes PIG-A, B, C e D induziram a formaçäo de lesöes granulomatosas no fígado e baço a partir do segundo dia pós-inoculaçäo e disseminaram-se pela via hemática, alcançando os pulmöes. O baço sempre apresentou maiores contagens de U.F.C., seguido pelo figado e pulmöes. Diferenças entre as estirpes foram constatadas através de análises das contagens de U.F.C de baço (T1: p<0,001; T2: p<0,001; T3: p<0,001 e T4: p<0,001), permitindo a construçäo da seguinte escala de virulência: PIG-B> PIG-A> PIG-D> PIG-C